豬瘟試劑盒使用說明書

豬瘟試劑盒又稱非洲豬瘟檢測試劑盒，豬瘟試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測，尤其適用于大型檢測機構的高通量快速篩查，提升檢測能力。

（快提核酸擴增試劑盒）

【產品名稱】

通用名稱：豬瘟試劑盒（PCR熒光探針法） 英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV,African Swine Fever Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調查。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

2、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭、熒光PCR專用反應管、記號筆等。

【操作步驟】一、樣品制備

1、血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號備用。

2、組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大?。?，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000rpm/分鐘離心2分鐘，取上清液于滅菌離心管中，編號備用。

二、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

二、PCR擴增

1、配液：取出PCR反應液、酶混合液，在室溫完全融化后，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應液17μL,酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量，混合兩種反應液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應管中，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻并瞬離,放入熒光PCR儀上運行以下程序：

步驟 條件 循環數 UNG處理 50°C：2分鐘1 預變性 95°C：3分鐘1 預擴増 95°C：8秒55C：8秒5 PCR擴增 95°C：8秒55°C：8秒40

熒光通道選擇FAM,在40循環階段每個循壞的55°C時收集熒光信號。設置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。

(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C：5秒55°C：30秒。)

【結果判定】1、基線和閾值設定；基線調整取6-15個循環的熒光信號，閾值設定以閾值線剛好超過陰性對照檢測熒光曲線的最高點為原則。

2、質量控制：反應結束后，陰性對照的檢測結果應無特定的擴增曲線，Ct值為＞38或無；陽性對照 的Ct值應≤30.0,且明顯的擴增曲線；否則實驗視為無效。

3、樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數型增加，且結果顯示Ct值<35.0,報告為陽性；未檢測到Ct 值或Ct值＞38或無明顯擴增曲線，則樣品判定為陰性。35≤Ct值≤8時，復檢一次，重復結果為陽性者判定為陽性，否則判定為陰性。

【注意事項】1、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按照操作步驟執行，在操作過程中對時間、試劑體積等精確控制可以獲得最好的結果。

2、實驗室應嚴格按照有關規定分區管理。各區間人員、器材、試劑及空氣流向應有產格要求。

3、有關耗材確保潔凈、無菌，核酸提取完成后盡快進入下一步試驗或冷凍保存。

4、預混后的試劑應盡量在短期內使用完畢，戶外使用應在加冰袋的泡沫盒保存，每日試驗完畢應及時冷凍保存。

5、對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套。

6、凍存試劑使用前應于室溫下完全融化，充分混勻，瞬時離心使液體完全沉于管底。

7、樣品、陰性對照封蓋后，在通風環境添加陽性對照并及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染。

8、擴增反應完畢后的PCR管嚴禁開蓋,應和試驗產生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室進行無害化處理。

【規格】50頭份/盒。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存，有效期12個月。

僅供獸醫診斷使用

豬瘟試劑盒一句話賣點：

豬瘟試劑盒是一款基于PCR熒光探針法的非洲豬瘟病毒核酸檢測工具，用于豬血液、組織等樣本中ASFV核酸的快速篩查，輔助疫病診斷與流行病學調查。

豬瘟試劑盒常見問題解答

1. 豬瘟試劑盒的檢測原理是什么？

本試劑盒采用PCR熒光探針法，通過特異性引物和熒光探針，對樣本中的非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸進行指數級擴增并實時監測熒光信號。反應過程中，熒光信號強度與擴增產物量成正比，通過儀器檢測Ct值判定樣本陰陽性。該方法靈敏度高、特異性強，適合大規模篩查。

2. 豬瘟試劑盒適用于哪些樣本類型？

試劑盒適用于豬血液（抗凝血或血清）、豬肉組織（脾臟、肝臟、淋巴結、扁桃體等病變組織）以及軟蜱樣本的非洲豬瘟病毒核酸檢測。血液樣本需使用EDTA抗凝采集，組織樣本需經充分勻漿研磨處理后取上清液進行檢測。

3. 豬瘟試劑盒的檢測流程需要多長時間？

從樣本處理到結果判定，整體檢測時間較短。樣本DNA提取約需5-10分鐘（反應液A+反應液B處理），PCR擴增程序包括UNG處理50°C 2分鐘、預變性95°C 3分鐘、預擴增及擴增循環約40個循環，總時長通常在1.5小時以內完成。

4. 豬瘟試劑盒的檢測結果如何判定？

陰性對照應無擴增曲線、Ct值＞38或無；陽性對照Ct值應≤30.0且擴增曲線明顯。待檢樣品Ct值＜35.0判定為陽性；未檢測到Ct值或Ct值＞38判定為陰性；35≤Ct值≤38時需復檢，復檢陽性則判定為陽性。

5. 豬瘟試劑盒的價格是多少？

該試劑盒產品型號為FT-ZWSJ1，參考價格為700元/盒。每盒規格為50頭份，具體采購價格可能因批量采購、經銷商政策等因素有所浮動，建議直接向供應商咨詢最新報價。

6. 豬瘟試劑盒如何儲存和運輸？

試劑盒應在-20°C以下避光保存，有效期12個月。運輸及戶外使用時應使用加冰袋的泡沫盒保存，確保低溫環境。凍存試劑使用前需于室溫下完全融化、充分混勻并瞬時離心，預混后的試劑應盡量在短期內使用完畢，每日試驗完畢應及時冷凍保存。

7. 豬瘟試劑盒操作中需要注意哪些事項？

實驗前應仔細閱讀說明書，嚴格按步驟操作。實驗室需分區管理，人員、器材、試劑及空氣流向應嚴格規范。避免徒手接觸熒光PCR管，使用不帶熒光物質的一次性乳膠手套。陽性對照需在通風環境中添加并及時封蓋，防止氣溶膠污染。擴增后的PCR管嚴禁開蓋，需無害化處理。

8. 豬瘟試劑盒有哪些實際應用案例？

本試劑盒適用于大型檢測機構的高通量快速篩查，可有效提升檢測能力。主要應用于生豬養殖場、屠宰場、獸醫實驗室及疾控中心的非洲豬瘟病毒核酸檢測、輔助診斷和流行病學調查。試劑盒僅供獸醫診斷使用，已在多地畜牧獸醫檢測體系中推廣應用。